CAS號 | EC號 | MDL編號 | 貨號 |
9025-65-4 | 3.1.30.2(BRENDA，IUBMB) | MFCD00131010 | GA01.01/02/03/04 |
說明
貝融生物生產的全能核酸酶BETAGENE?-ProNuclease是來源于Serratia Marcescen（粘質沙雷氏菌）的非特異性核酸內切酶，可在鏈內任意核苷酸間進行切割，將核酸完全消化成2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。
本品經基因工程改造在E.coli中表達純化，分子量為30 kDa，純度≥99%（SDS-PAGE、HPLC），比活 ≥ 1500000U/mg，蛋白酶活 > 250U/μL，內毒素<0.01 EU/kU。
產品特點
去除疫苗類產品中的外源性核酸、基因藥物中病毒載體的核酸殘留,提高產品安全性；
降低核酸引起的料液粘度,縮短處理時間，提高后續純化過程的效率和終產品終收率；
去除纏繞在各類顆粒表面的核酸，有利于顆粒中目標充分的釋放和純化；
生物基因重組蛋白(如∶包涵體的處理)，提高復性后可溶性包涵體的回收率；
ELISA、柱層析、二維電泳和印跡分析的樣品準備，經核酸酶處理后可明顯提高分辨率和回收率。
核酸酶殘留的去除
核酸酶也是一種蛋白質，如果加入到細菌或者細胞裂解液中，將會隨著純化步驟如其他雜蛋白一樣被去除，如果加入到病毒或者病毒類疫苗中，由于核酸酶和病毒的分子量差異巨大，可以采用凝膠過濾的方式如sepharose6FF去除，核酸酶的殘留量可以采用商品化的試劑盒進行檢測。
1個單位（U）的定義：在pH 8.0、2.625 ml反應體積、37 °C條件下，在30分鐘內使ΔA260吸收值吸收值變化 1.0（相當于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）。
用于科學研究中降低細胞上清和細胞裂解液的粘度，提高蛋白純化效率及功能研究，并且可以有效防止細胞治療和疫苗研究中人外周血單核細胞(PBMC)的結團。廣泛用于去除生物制品中的核酸。
本品儲存于緩沖液（20 mM Tris-HCl （pH 8.0），2 mM MgCl2，20 mM NaCl，and 50% Glycerol）。
酶的最佳作用條件是pH 為 8.0 - 9.2，37 °C半小時。超出這個范圍酶仍然有活性，只是要適當延長作用時間；
鎂離子對酶的活性是必須的，推薦使用的濃度為2 mM，如果樣品中有EDTA等金屬螯合劑，需要去除，或者加入過量的鎂離子來中和EDTA；
酶的活性比較穩定，室溫放置短期內不會有太多影響，長時間保存須放置在-20°C冰箱內，由于保護液中含有50%甘油，所以酶液不會凍結，酶被稀釋后盡快用掉，避免反復凍融 。
質量標準
| 檢測項目 | 標準 | 方法 |
外觀 | 無色澄清透明 | 目測 |
鑒別 | 陽性 | 中國藥典2020版 通則（3401） |
宿主蛋白殘留 | ≤ 0.005% | 中國藥典2020版 通則（0731） |
可見異物 | 無顆粒 | 中國藥典2020版 通則（0904） |
pH值 | 7.0 - 9.0 | 中國藥典2020版 通則（0631） |
酶活 | ≥ 250kU/mL | 在37℃，pH8的反應條件，2.625mL的反應體系中，在30分鐘內使ΔA260吸收值變化1.0（完全消化37μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為1個酶活單位（U） |
純度 | ≥ 99% | 中國藥典2020版 通則（0541）、 SEC-HPLC法 |
蛋白酶活性 | 無活性 | 1 kU/ml 酶，與底物37℃ 孵育60 min |
內毒素 | ≤ 0.01 EU/kU | 中國藥典2020版 通則（1143） |
微生物 | 不得檢出 | 中國藥典2020版 通則（1101） |
病原體 | 陰性 | 中國藥典2020版 通則（3306） |
支原體 | 陰性 | 支原體檢測試劑盒，PCR法 |
重金屬殘留 | ≤ 10 ppm | 中國藥典2020版 通則（0821） |
外觀：無色澄清透明 |
目測 |
鑒別：陽性 |
中國藥典2020版 通則（3401） |
宿主蛋白殘留 ≤ 0.005% |
中國藥典2020版 通則（0731） |
pH值 ：7.0 - 9.0 |
中國藥典2020版 通則（0631） |
酶活 ≥ 250kU/mL |
在37℃，pH8的反應條件，2.625mL的反應體系中，在30分鐘內使ΔA260吸收值變化 1.0（完全消化37μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為1個酶活單位（U） |
純度 ≥ 99% |
中國藥典2020版 通則（0541）、 SEC-HPLC法 |
蛋白酶活性：無活性 |
1 kU/ml 酶，與底物37℃ 孵育60 min |
內毒素 ≤ 0.01 EU/kU |
中國藥典2020版 通則（1143） |
微生物：不得檢出 |
中國藥典2020版 通則（1101） |
病原體：陰性 |
中國藥典2020版 通則（3306） |
| 支原體：陰性 |
支原體檢測試劑盒，PCR法 |
重金屬殘留 ≤ 10 ppm |
中國藥典2020版 通則（0821） |
儲存分類代碼 | WGK | 閃電（F) |
10-Combustible liquids | WGK 1 | Not Applicable |
閃電（C) | 個人防護裝備 | |
Not Applicable | Eye shields, gloves | |
COMPOSITION E.COLI RECOMBINANT NUCLEASE | |
MOLECULE WEIGHT APPROX. 30kD | |
CAT.No GA01.01/GA01.02 | APPEARENCE COLORLESS |
ENDOTOXINES < 0.01 EU/kU | PROTEASE NEGATIVE |
PURITY > 95 % BY SDS-PAGE. > 95 % BY HPLC | |
ACTIVITY ≥ 250 kU/mL，DNA; pH 8.0；30MIN; 37℃ | |
SPECS. ACTIVITY 1.5 X 106 kU/mL；CALCULATED ON PROTEIN | |
AA SEQUENCE ADTLESIDNCAVGCPTGGSSNVSIVRHAYTLNNNSTTKFANWVAYHITKDTPASGKTRNWKTDPALNPADTLAPADYTGANAALKVDRGHQAPLASLAGVSDWESLNYSNITPQKSDLNQGAWARLEDQERKLIDRADISSVYTVTGPLYERDMGKLPGTQKAHTIPSAYWKVIFINNSPAVNHYAAFLFDQNTPKGADFCQFRVTVDEIEKRTGLIIWAGLPDDVQASLKSKPGVLPELMGCKN | |
FORMULATION 20 mM TRIS-HCl (pH 8.0)，2 mM MgCL2，20 mM NaCL，50% GLYCEROL | |
USAGE FOR REASEARCH OR FURTHER MANUFACURE USE | |
STORAGE -20℃ | |
Specs
FAQs
1.5 x 106 kU/mL；calculated on protein
